YMDD突变株HBV转基因小鼠的制备及检测

目的？建立YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠，为乙肝防治研究提供转基因动物模型。方法？？采用受精卵显微注？射法，将带有YMDD突变的对拉米夫定有耐药性的1.3拷贝HBV基因注入FVB/N单细胞受精卵的原核内，制备YMDD耐药突变？株HBV转基因小鼠。采用PCR检测外源基因的整合和传代情况，采用ELISA和免疫组化等方法检测HBsAg在肝、肾中的复制和？表达情况。结果？？注射受精卵3401枚，产269只F0？代仔鼠，PCR阳性33只，外源基因的整合率12.3%。9只转基因鼠血清HBV？？DNA弱阳性，拷贝数低于10？？？3？？拷贝/ml;免疫组化结果显示肝组织和肾组织均有HBsAg表达，且肾组织中的表达强于肝组织。经传？代产下47只F1？代转基因鼠，目的基因PCR阳性率为27.6%，且肝组织和肾组织中HBsAg均有表达，分布特性与F？？？0？？代一致。结论？？？？成功制备出体内有复制表达而且可以传代YMDD耐药突变株HBV的转基因小鼠。