肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8蛋白反式激活基因的筛选

[摘要］目的？应用抑制性消减杂交（SSH）技术及生物信息学技术筛选肝细胞内人类次要组织相容性抗原-HA8（HLA-HA8）？的反式激活基因。方法？？以HLA-HA8基因表达质粒pcDNA3.1（-）-HLA-HA8和空载体pcDNA3.1（-）转染HepG2细胞，提取？mRNA并反转录合成双链cDNA（dscDNA），分别标记为Tester和Driver;经RsaI酶切后，将TestercDNA分成两组，分别与两种不同？的接头adapter1和adapter2衔接，再与DrivercDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应，将产物与pGEM-Teasy载体连？接，构建cDNA消减文库，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果？？成功构建？HLA-HA8反式激活基因差异表达cDNA消减文库。扩增后得到101个阳性克隆，菌落PCR分析均得到200～1000bp的插入片段。？随机挑选其中28个阳性片段测序，同源分析结果显示，共获得16种编码基因，其中4个功能未知。结论？？HLA-HA8基因反式调节？基因与细胞结构和生长、物质及能量代谢、物质转运和信号转导密切相关，为HLA-HA8的功能以及HBV感染慢性化机制研究提供？了新的思路。