抗HBsFab-IFNα融合蛋白的制备与初步鉴定

［摘要］目的？构建抗HBsAg的pCombFab-IFNα载体，原核表达具双重生物活性的抗HBsFab-IFNα融合蛋白。方法？？以？pBAD-Fab和pBADIFNα作为模板，分别扩增Fd、λ和IFNα基因，经相应的限制性内切酶酶切后分3次克隆入pComBHss质粒，转化？XL-1Blue大肠埃希菌。限制性酶切和测序鉴定重组质粒，免疫蛋白印迹（Westernblotting）和斑点印迹（Dotblotting）鉴定融合蛋白的？表达及抗原结合活性。结果？？重组载体的酶切、电泳及测序表明抗HBsFab-IFNα基因克隆正确。表达产物经12%SDS-PAGE电？泳、转印，Westernblotting显示该融合蛋白分子量约为65kD，Dotblotting显示其与HBsAg具有结合能力。细胞病变抑制法测定？IFNα生物学活性为7.8×10？4？？～5.1×10？？5？？U/ml。结论？？该原核系统成功表达了抗HBsFab-IFNα融合蛋白，表明其既具有抗HBsAg？结合能力，又具备IFNα的生物活性，为进一步的系统表达和应用研究提供了条件。