带FLAG标签小鼠HuR真核表达载体的构建及其生物学功能的鉴定

［摘要］目的？构建人抗原R（HuR）的真核表达载体，观察其在NIH3T3细胞中的表达并初步分析其生物学功能。方法？？提？取NIH3T3细胞总RNA并反转录为cDNA，以cDNA为模板PCR扩增得到小鼠HuR编码序列，酶切后克隆至pcDNA3.1-FLAG载？体;重组载体经PCR、酶切、测序鉴定正确后瞬时转染NIH3T3细胞，采用Westernblotting分析HuR在细胞中的表达，并采用Real-？timePCR检测HuR过表达对DUSP1mRNA水平的影响。结果？？成功构建了重组质粒pcDNA3.1-HuR-FLAG，Westernblotting显？示该质粒能在NIH3T3细胞中高效表达，Real-timePCR结果表明HuR过表达可提高细胞内DUSP1基因的mRNA水平。结论？？成？功构建了带FLAG标签的HuR真核表达载体，该载体能在NIH3T3细胞中有效表达，并具有相应的生物学功能，为深入研究肿瘤细？胞中HuR对DUSP1基因表达的调控机制奠定基础。