人乳头瘤病毒6b型L1基因的克隆及表达

［摘要］目的？研究尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒（HPV）6b型晚期基因L1（HPV6bL1）在真核细胞内的表达。方法？？PCR技术？扩增原核重组质粒PQE40-HPV6bL1中L1基因，酶切后与真核表达质粒PEGFP-C1连接，转化入感受态大肠埃希菌DH5α，经扩增后？酶切鉴定，挑选阳性克隆进行测序。以重组质粒PEGFP-HPV6bL1转染COS-7细胞，荧光显微镜下观察融合蛋白的表达，RT-PCR检？测HPV6bL1mRNA的表达。结果？？双酶切及测序鉴定显示，重组质粒中插入的目的基因片段及载体DNA大小、方向和插入位点均？正确，PEGFP-HPV6bL1构建成功。重组体成功转染进COS-7细胞，在荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白表达，RT-？PCR检测到HPV6bL1mRNA的表达。结论？？建立了HPV6bL1绿色荧光真核表达系统，为研究该蛋白质的功能奠定了基础。