小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究

［摘要］？目的？构建小鼠ATP酶β亚单位（ATPaseβ）真核表达载体，并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法？取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列，将其连接到pMD18-T载体上，然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列，再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上。采用脂质体转染法转染NIH3T3细胞及293细胞，在荧光显微镜下观察结果。结果？PCR、双酶切和测序结果表明，重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现，该质粒能够在NIH3T3细胞中表达，表达产物主要定位于细胞质，细胞膜上也有表达，而在293细胞中只表达于细胞质。结论？成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体，该载体能够在哺乳动物NIH3T3及293细胞中有效表达并正确定位，为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。