PDT/GR-ΔLBD融合蛋白的表达、纯化及穿膜特性的鉴定

目的？构建穿膜肽（PDT）和缺失结合配体结构域的小鼠糖皮质激素受体（GR-ΔLBD）融合基因表达载体，经原核表达、？纯化后，进行穿膜特性的鉴定。方法？？质粒pEGFP-GR-ΔLBD经双酶切，获得目的基因片段GR-ΔLBD，将该基因片段亚克隆入原核？表达载体pGEX-PDT，获得pGEX-PDT/GR-ΔLBD融合基因表达载体。将表达载体转化大肠杆菌，经IPTG诱导表达、谷胱甘肽-琼脂？糖树脂处理、谷胱甘肽洗脱液洗脱后，获得PDT/GR-ΔLBD融合蛋白，SDS-PAGE分析融合蛋白;采用荧光素FITC体外标记PDT/？GR-ΔLBD融合蛋白（终浓度分别为0、500、1000nmol/L），与小鼠肺上皮细胞TC-1共培养2h，在荧光显微镜下观察其穿膜特性。结果？？？？成功构建了融合基因原核表达载体pPDT/GR-ΔLBD，并能表达蛋白产物，大小约78.6kD，与融合蛋白PDT/GR-ΔLBD的理论计算？值（80kD）相符。随着PDT/GR-ΔLBD浓度的增加，进入TC-1上皮细胞的PDT/GR-ΔLBD明显增多，并可在胞核中浓聚。结论？？？？PDT/GR-ΔLBD融合蛋白具有良好的可溶性和穿膜特性，为进一步研究PDT/GR-ΔLBD融合蛋白在抗炎过程中的作用奠定了基础。