端粒酶反转录酶基因介导的人骨髓基质干细胞永生化研究

［摘要］目的？建立永生化人骨髓基质干细胞系，为组织工程提供种子细胞库及标准化细胞系。方法？取单克隆培养的人骨髓基质干细胞，采用脂质体转染法将人端粒酶反转录酶（hTERT）基因导入细胞，G418筛选后获得阳性克隆，体外连续扩增培养，RT-PCR检测转染细胞内hTERT基因的整合与表达。取转染后第100代细胞，用成骨诱导条件培养基（普通培养基加地塞米松、β-甘油磷酸、维生素C）、软骨诱导条件培养基（普通培养基加地塞米松、TGF-β、维生素C）、心肌细胞诱导条件培养基（普通培养基加5-氮胞苷）分别向成骨、软骨、心肌细胞诱导培养。于培养后第7、14、21、28天，采用免疫细胞化学染色观察成骨细胞诱导Ⅰ型胶原、骨钙素的表达;采用茜素红染色观察钙结节形成;采用免疫细胞化学染色观察软骨细胞诱导Ⅱ型胶原的表达，同时进行甲苯胺蓝染色;采用免疫细胞化学染色观察心肌细胞诱导横纹肌肌动蛋白的表达，分析细胞系向成骨、软骨及心肌细胞分化的能力。结果？hTERT稳定转染入人骨髓基质干细胞，转化细胞端粒酶表达阳性。转化细胞在体外长期连续培养下生长良好，已传至136代。取第100代细胞进行诱导分化，结果显示其能向成骨、软骨及心肌细胞分化。结论？外源性hTERT的导入可致人骨髓基质干细胞永生化，并维持成体干细胞的多向分化特性，可为组织工程提供种子细胞库并为组织工程种子细胞研究提供标准化细胞。