老年Fischer344大鼠耳蜗损伤外毛细胞的定量观察

［摘要］目的？通过定量观察老年Fischer344大鼠耳蜗损伤的外毛细胞，揭示年龄相关的大鼠耳蜗基底膜外毛细胞损伤的发？展趋势和外毛细胞死亡的主要途径。方法？？32只Fischer344大鼠分为两大组:青年组（13只，3～4月龄）和老年组（19只，20～27月？龄），再将老年组大鼠进一步分为20～23月龄组（12只）和24～27月龄组（7只）。应用电位反应测听仪检测不同频率短纯音（5、10、20？和40kHz）诱发的青年和老年大鼠双侧听性脑干诱发电位反应阈值（ABR）。听觉功能测试后，将动物断头，解剖取出双耳听泡，固定？耳蜗组织，分离耳蜗基底膜。分别用细胞核DNA染料碘化丙锭（PI）和原位末端标记（TUNEL）染色不同月龄大鼠耳蜗基底膜细胞？核，鉴别凋亡、坏死的毛细胞。异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽对存在于毛细胞表皮板和纤毛的丝状肌动蛋白进行染色，确认缺失的？耳蜗毛细胞。荧光显微镜下自耳蜗顶部到底部计数损伤（核缺失、核固缩和核肿胀）的外毛细胞，绘制耳蜗图。结果？？老年Fischer？？344大鼠的不同频率ABR阈值均高于青年组（P<0.05）。明显的TUNEL染色阳性反应不仅出现于不同程度固缩的外毛细胞核，而？且见于细胞核型不变、PI染色略有加深的老年大鼠耳蜗外毛细胞核。定量观察发现，老年大鼠耳蜗外毛细胞损伤率（核缺失、核固缩？和核肿胀）平均为32.75%±11.80%，其中24～27月龄组耳蜗外毛细胞损伤率（37.85%±9.00%）明显高于20～23月龄组（23.75%±？7.65%，P=0.012）。与20～23月龄组大鼠比较，24～27月龄组耳蜗底回外毛细胞损伤增加率（32.20%±11.78%）明显高于顶回？（12.80%±11.41%，P=0.022）。20～27月龄大鼠耳蜗基底膜核固缩外毛细胞数目（16.74±7.16）明显多于核肿胀外毛细胞（2.31±？3.20，P=0.0001）。结论？？老年大鼠凋亡外毛细胞DNA特征性变化早于细胞核形态学的改变，耳蜗基底膜底回为老年耳蜗退行性变？发展的主要部位，凋亡为老年大鼠耳蜗外毛细胞死亡的主要途径。