胎球蛋白A的纯化及其对3T3-L1脂肪细胞胰岛素通路的抑制作用

目的？对胎球蛋白A（AHSG）蛋白进行纯化，并探讨其对脂肪细胞胰岛素通路的调节作用。方法？？通过硫酸铵沉淀、？PEG沉淀、DEAE离子交换和Protamine亲和层析方法纯化血浆中的AHSG蛋白。培养3T3-L1前脂肪细胞并分化为成熟脂肪细胞，？置于低糖DMEM培养基培养，然后加入终浓度为100μg/ml和600μg/ml的AHSG及终浓度为600μg/ml的人白蛋白（HAS）分别进行？培养，最后用不同浓度（0、10、20nmol/L）的胰岛素刺激细胞。采用Westernblotting检测AHSG和HSA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素下？游分子IRS-1和Akt的磷酸化水平的影响。结果？？从血浆中纯化的AHSG蛋白纯度达90%以上。纯化的AHSG在100μg/ml浓度？下可以减弱胰岛素对IRS-1蛋白磷酸化的影响，在600μg/ml浓度下可以完全抑制IRS-1蛋白磷酸化;纯化的AHSG在100μg/ml浓？度下可以减弱胰岛素对Akt蛋白磷酸化的影响，在600μg/ml的浓度下可以明显抑制Akt蛋白的磷酸化，而600μg/ml的HAS则不能？抑制IRS-1和Akt蛋白的磷酸化。结论？？从血清中纯化出的AHSG在生理浓度下可以抑制胰岛素对3T3-L1细胞中IRS-1和Akt蛋？白的磷酸化作用，在脂肪细胞胰岛素通路中扮演着重要角色。