PCR-RFLP技术在布氏菌鉴定与分型中的应用

［摘要］目的？利用PCR-RFLP技术扩增7株布氏菌临床分离株16SRNA基因片段，为该菌的分子诊断学、遗传学和流行病学？研究提供实验依据。方法？？参考GenBank公布的布氏菌ATCC25840标准株序列，设计针对该菌16SRNA保守区的特异性引物，从？临床分离培养7株布氏菌，提取DNA并行16SRNA片段的PCR扩增。将PCR产物克隆至PGEM-T载体进行测序并选用合适的限？制性内切酶进行RFLP分析，将分析结果用于临床株的同源性及变异位点的研究，并对感染患者的临床资料进行回顾性分析，研究不？同布氏菌基因型与感染患者临床特征的相关性。结果？？利用PCR扩增出的目的片段与预期一致，大小约为1500bp。测序及同源性？分析表明，7株临床分离株之间存在98.88%的同源性和11个变异位点。RFLP结果将7株菌分为4个基因型，临床资料回顾性分析？患者不同基因型与临床表现之间无明显联系。结论？？利用PCR技术扩增布氏菌16SRNA基因片段可以实现对该菌的早期诊断，为？布氏菌的分子遗传学和流行病学提供依据。