肠道病毒71型血清学检测方法的建立及应用

［摘要］目的？在原核表达系统中对肠道病毒71型（EV71）基因进行克隆、表达、纯化，建立血清IgM抗体的检测方法，用于？EV71感染的早期诊断。方法？？检索EV71VP1基因序列，设计合成引物，并在引物两端插入酶切位点，采用RT-PCR分离EV71VP1？全基因序列。PCR产物回收、纯化，插入T载体进行序列同源性测定。再插入表达质粒载体pRSET，构建pRSET-EV71重组质粒。？利用纯化后的表达产物，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测EV71IgM抗体。共收集31例临床诊断为手足口病患儿及36例健康？儿童的血清标本进行检测。结果？？PCR产物片段大小约890bp，与预期VP1全基因序列长度一致，并且克隆入T载体后序列测定与？？？？GenBank公布序列的同源性达100%;重组蛋白大小约为890bp，与预期蛋白片段一致。ELISA检测结果显示，在手足口病患儿中IgM？抗体阳性7例，健康儿童中则未发现阳性，差异有统计学意义。结论？？成功建立了针对EV71IgM抗体的检测方法。