慢病毒介导的Ⅰ型胶原shRNA在大鼠系膜细胞中的表达

［摘要］目的？探讨慢病毒介导的Ⅰ型胶原（ColⅠ）短发夹RNA（shRNA）在大鼠系膜细胞的表达情况。方法？？利用三质粒合成？法将表达质粒合成慢病毒表达载体，分别用感染增强剂（对照组）、空慢病毒载体（pSC-GFP组）和慢病毒表达载体（pSC-GFP/ColⅠ组）？感染大鼠系膜细胞。采用流式细胞仪检测各组大鼠系膜细胞的转染效率，并采用RT-PCR和Westernblotting方法检测各组ColⅠ？？mRNA及ColⅠ蛋白表达情况。结果？？pSC-GFP和pSC-GFP/ColⅠ均能高效感染大鼠系膜细胞，其中pSC-GFP感染效率为72.42%，？pSC-GFP/ColⅠ感染效率高达75.42%。RT-PCR检测提示pSC-GFP/ColⅠ组细胞ColⅠmRNA表达量较对照组、pSC-GFP组显著降低？（P<0.05），其抑制效率为32.64%±0.12%，而后两组ColⅠmRNA表达差异无统计学意义。Westernblotting检测显示，与对照组、？pSC-GFP组比较，pSC-GFP/ColⅠ组蛋白表达明显降低（P<0.05），而对照组与pSC-GFP组之间ColⅠ蛋白表达差异无统计学意义。结？论？？慢病毒载体能稳定、高效地将ColⅠshRNA转染系膜细胞，并明显抑制ColⅠ的表达，为肾脏纤维化的基因治疗提供了理论依据。