人ID4基因启动子及上游顺式表达调控元件的克隆及特征分析

目的？克隆人ID4基因启动子及上游顺式调控元件，并对其结构及调控元件的特征进行生物信息学分析。方法？？从？NCBI人类基因组数据库中截取ID4基因转录起始位点上游5′侧翼区约2242bp及下游5′非翻译区212bp的基因组序列。利用TESS？和Genomax等在线分析软件进行启动子及上游调控元件的特征分析。设计PCR引物，采用分段扩增法，获得长度分别为1811bp和？650bp的两条产物片段，分别插入pGEM-T载体，转化至Top10感受态大肠埃希菌，筛选阳性克隆。先后应用KpnⅠ/NheⅠ、KpnⅠ/？？EcoRⅠ对获得的两个pGEM-T重组载体及pGL？？？3？？？Basic荧光素酶报告载体进行双酶切，T？？？4？？？DNA连接酶连接，转化至Top10感受态大？肠埃希菌，筛选阳性克隆，最后测序鉴定。结果？？获得长度为2461bp的ID4基因启动子DNA序列，经测序证实与人类基因组序列一？致。ID4基因具有Ⅱ型启动子特征，有2个非常显著的上游元件（TATA盒和GC盒），GC含量占总碱基含量的65.9%。在转录起始？位点上游-1000bp与下游212bp之间分别存在多个可能具有正向和负向调控作用的顺式元件。结论？？成功克隆了人ID4基因启动？子及其顺式调控元件，并证明ID4基因具有典型的Ⅱ型启动子结构。筛选出3个最有可能对ID4表达起调控作用的顺式元件，分别为？糖皮质激素受体、单磷酸腺苷（cAMP）结合蛋白受体及雌激素受体。