人MDC1基因shRNA反转录病毒载体的构建及鉴定

【摘要】目的？建立反转录病毒介导的MDC1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞（HeLa）中对MDC1表达的影？响。方法？？将人MDC1基因的RNA干扰双链DNA片段重组到反转录病毒质粒pSilencer5.1-H1Retro中，构建携带人MDC1基因的？RNA干扰反转录病毒载体psiRNA-MDC1。经PT67细胞包装后，产生的重组反转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞，并用嘌呤霉？素筛选稳定的细胞克隆。采用RT-PCR和Westernblotting检测细胞中MDC1mRNA和蛋白表达的变化。结果？？重组psiRNA-？MDC1质粒经测序鉴定正确;重组反转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;RT-PCR和Westernblotting检？测人MDC1mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论？？携带人MDC1基因RNA干扰双链DNA片段的反转？录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MDC1mRNA和蛋白表达，为进一步研究MDC1在宫颈癌中的作用奠定了基础。