NF-κB在肝细胞生长因子介导的肝脏干细胞增殖效应中的作用

目的？研究NF-κB途径在肝细胞生长因子（HGF）介导的肝脏WBF-344细胞增殖信号转导调控中的作用。方法？？用？不同浓度的HGF（0，20，40，80，100ng/ml）刺激WBF-344细胞，24h后用？？？3？？H-TdR掺入法检测细胞的增殖效应。采用脂质体转染方？法用位点阴性的IκBα蛋白突变体质粒转染WBF-344细胞，阻断NF-κB活性。用HGF（40ng/ml）刺激0、15、30、60、120min后提取核？蛋白，通过凝胶阻滞实验（EMSA）检测NF-κB的结合活性。采用脂质体转染法将NF-κB报告基因质粒BDGreatEscAPe？？？TM？？？SEAP？？vector瞬时转染WBF-344细胞后用不同浓度的HGF（0、10、20、40ng/ml）刺激8h，通过BDGreatEscAPe？？？TM？？？SEAP荧光检测系统检测？NF-κB的转录活性。用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和ASA预处理WBF-344细胞，再用HGF（40ng/ml）刺激24h，通过？？？3？？H掺入法？检测细胞增殖效应。结果？？HGF具有促进WB-F344细胞增殖的作用，且呈剂量效应正相关趋势。HGF能够明显提高NF-κBDNA？的结合活性，NF-κB复合物在HGF作用15min后即出现，并在30～60min时达到高峰，以后逐渐减退。HGF能够显著促进NF-κB的？转录活性，呈剂量效应相关趋势。用NF-κB抑制剂BAY-11-7082或ASA阻断NF-κB后，HGF诱导的WBF-344细胞增殖能够被明？显抑制;在转染NF-κB抑制质粒的细胞，HGF介导的WBF-344细胞增殖效应被完全阻断。结论？？HGF可促进WBF-344细胞增殖，？且呈剂量效应正相关趋势。HGF介导的WBF-344细胞增殖效应依赖NF-κB的活化，NF-κB的激活对于HGF介导的WBF-344细？胞增殖效应是必须的。？？？