一种高效扩增人T细胞受体α链可变区基因方法的建立

？目的？建立一种高效扩增人T细胞受体（TCR）α链可变区（Vα）基因的方法。方法？？根据TCRVα32个亚家族的基因？序列特点，设计扩增Vα基因的上游内、外引物各42条，并将上游内、外引物各分为5组简并引物。在恒定区（C区）设计下游内、外引？物，测序引物以及扩增Cα基因的上游引物各1条。提取细胞RNA，用PolyA介导反转录后，采用巢式PCR扩增正常人外周血单个？核细胞（PBMC）中CD8T细胞TCRVα的32个亚家族基因，以JurkatT淋巴瘤细胞作为对照。用T-easy载体克隆RT-PCR产物，对？克隆基因进行测序分析。结果？？从正常人CD8T细胞中扩增到了所有TCRVα亚家族基因，以10个Jurkat细胞所提取的RNA作？为模板即可获得成功扩增。TCRVα同一亚家族基因的同源性均大于75%，序列差异主要在CDR3高变区。结论？？建立了一种高效？灵敏的TCRVα编码基因扩增方法，为抗原特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）的TCR克隆和功能研究打下了良好基础。？？