hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs与心肌细胞共培养分化为心肌样细胞的实验研究

目的　将超级化环化核苷酸门控阳离子通道4(hHCN4)基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与乳鼠心肌细胞(CM)进行共培养，观察其细胞连接功能及起搏功能。方法　分离培养乳鼠CM并进行细胞标记，将已标记的CM分别与大鼠BMSCs、hHCN4+BMSCs及hHCN4－BMSCs混合培养。共培养4d后检测各组细胞的自发搏动频率，荧光显微镜下观察两类细胞的空间位置关系，Westernblotting检测缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达，透射电镜观察细胞间缝隙连接的形成情况。结果　共培养4d后，心肌的自发搏动频率明显增高。荧光显微镜下观察发现存在空间位置上相邻的BMSCs和CM。Westernblotting结果显示，hHCN4+BMSC与CM共培养组Cx43表达明显高于hHCN4－BMSCs与CM共培养组。透射电镜观察显示，hHCN4+BMSCs可与相邻细胞形成指状交错的连接。结论　hHCN4基因修饰的大鼠BMSCs可与CM建立有效的电机械连接，其自发起搏功能更接近CM，为进一步进行生物起搏治疗提供了实验依据。