聚肌胞苷酸、脂多糖及肽聚糖对人气道黏膜天然免疫功能影响的实验研究

目的　研究聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]、脂多糖(LPS)及肽聚糖(PGN)对人气道黏膜屏障及炎性介质表达的影响，进而了解气道黏膜对不同Toll样受体配体的天然免疫应答反应。方法　采用Transwell系统培养人16HBEs气道上皮细胞建立人气道黏膜体外模型，分别给予Poly(I:C)、LPS及PGN顶侧刺激，对照组仅给予MEM+GlutaMax-Ⅰ培养基培养。通过测定跨膜电阻抗(TER)判断16HBEs细胞间的小分子通透性，测定基底侧培养液中FITC-右旋糖酐浓度判断大分子细胞通透性，用ELISA法检测干预24h后培养细胞顶侧及基底侧上清液中IL-8、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及TNF-α的蛋白含量。结果　10μg/mlPoly(I:C)导致人气道上皮细胞间TER显著降低，FITC-右旋糖酐通透性增加(P<0.01)，10μg/mlLPS及100μg/mlPGN刺激对气道上皮细胞TER及FITC-右旋糖酐通透性无明显影响。IL-8和TNF-α表达在Poly(I:C)、LPS及PGN组细胞顶侧和基底侧均较对照组显著增加(P＜0.05)。GM-CSF表达在3组细胞顶侧均较对照组增加(P＜0.05)，仅Poly(I:C)组基底侧表达较对照组增加(P＜0.05)，LPS和PGN组基底侧与对照组比较无明显变化。Poly(I:C)组、LPS组和PGN组细胞顶侧IL-8和GM-CSF浓度增高程度高于基底侧，形成浓度梯度。结论　Poly(I:C)可破坏气道黏膜屏障完整性，导致小分子和大分子通透性增加，同时刺激细胞定向向顶侧分泌炎性介质，LPS及PGN对气道黏膜屏障无影响，但能诱导细胞向顶侧定向分泌炎性介质，提示病毒及细菌感染所致气道炎症与Toll样受体通路介导的气道黏膜天然免疫应答有关。