缺氧诱导乳鼠心肌细胞内质网应激的时效性观察

[摘要]　目的　研究不同缺氧时间心肌细胞内质网应激蛋白的表达变化，探讨内质网应激在心肌细胞凋亡中所起的作用。方法　将体外培养的乳鼠心肌细胞随机分为0h(对照组)及缺氧6、12、18、24、30h组，缺氧组通入95%N2及5%CO2混合气体进行不同缺氧时间处理，对照组在常氧状态下培养，不给予缺氧刺激。采用Westernblotting检测内质网应激蛋白GRP78、CHOP及Caspase-12的表达变化，采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况。结果　对照组GRP78蛋白有一定量的基础性表达，缺氧6h后蛋白表达呈上升趋势，缺氧12h时表达显著增加(P<0.05)，缺氧18h时表达至高峰，但随着缺氧时间延长(>18h)GRP78表达呈下降趋势。缺氧12h内质网应激蛋白CHOP、Caspase-12蛋白开始表达，缺氧18~30h呈持续升高(P<0.05)。流式细胞术检测显示，缺氧12h即出现典型的细胞凋亡特征，缺氧18、24、30h组心肌细胞凋亡数量明显增多，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论　内质网应激在心肌细胞缺氧不同时期发挥不同的作用。