Exendin-4介导的猪髋动脉内皮细胞NO释放与细胞内钙离子浓度变化的关系

[摘要]　目的　观察Exendin-4(Ex-4)介导的猪髋动脉内皮细胞(PIEC)内一氧化氮(NO)释放与钙离子变化的关系，探讨Ex-4影响内皮细胞功能的机制。方法　免疫荧光法检测确认PIEC上存在胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)。NO荧光探针(DAF-FMDA)标记细胞内NO，荧光酶标仪检测Ex-4作用内皮细胞后不同时间点[加药前(0h)，加药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h，共13个时点]细胞内NO释放情况；钙离子荧光探针(Fura-2AM)标记细胞内钙，荧光酶标仪检测细胞内3个不同时段(0~30min，4~4.5h，8~8.5h)钙浓度变化情况；评价Ex-4诱导PIEC释放NO与细胞内钙的关系。结果　PIEC上有GLP-1R表达。Ex-4引起PIEC内NO增加，且有时间依赖关系，与0h比较，4h开始NO明显增高(P<0.05)，8h时细胞内NO含量较其他各时点均明显增高(P<0.05)。Ex-4干预后0~30min、4~4.5h和8~8.5h3个时段细胞内钙均较对照组高(2.042±2.115vs0.634±0.352，P<0.01；0.413±0.154vs0.113±0.111，P<0.01；0.309±0.133vs0.063±0.120，P<0.01)。Ex-4干预PIEC后NO释放前期前段(0~30min)，细胞内钙逐渐上升(拟合曲线：y=0.106x+1.326)；NO释放中期前段(4~4.5h，y=0.003x+0.374)和NO释放后期前段(8~8.5h，y=－0.001x+0.324)细胞内钙浓度虽同NO一样也高于对照组，但没有明显的变化趋势。结论　Ex-4可增加内皮细胞内NO释放，该过程与细胞内钙变化密切相关。