多种食源性致病菌的基因芯片检测技术

[摘要]　目的　探讨随机PCR结合基因芯片技术用于多种食源性致病菌筛查检测的可行性。方法　利用ClustalX和Oligo6.0软件设计探针，进行生物信息学比对验证特异性，探针末端修饰后合成并制备基因芯片。使用锚定随机引物扩增细菌基因组DNA，偶联荧光染料的扩增产物与芯片杂交后扫描检测。对随机PCR及杂交反应等一系列检测条件进行优化。选取16种病原细菌进行芯片特异性验证，使用4种食源性致病菌DNA进行芯片灵敏度检测及重复性评价，制备细菌DNA混合样本和痢疾志贺菌模拟水污染样本对芯片检测效能进行初步考核。结果　9种食源性致病菌获得阳性结果，基因组DNA检测灵敏度102～103pg/μl，芯片重复性变异系数(CV)值<15%，混合样本检测与预期结果一致，最低可检测水样本中痢疾志贺菌的最低浓度为3.54×105cfu/ml。结论　初步建立的基于随机引物PCR的基因芯片技术进行多种食源性致病菌检测的方法，为病原细菌高通量筛查检测提供了一种新的思路。