携带Bcl-2基因的慢病毒对原代培养的人卵巢颗粒细胞的影响

[摘要]　目的　探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法　构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体，包装成高滴度慢病毒，将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞，观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况；将人卵巢颗粒培养24h后，分为3组。实验组：加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2；空白对照组：不加病毒；空载体对照组：加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天，采用Westernblotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果　原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁，集落样生长，呈多角形或梭形；当MOI为100时，细胞的形态和生长不受影响，且感染效率较高，感染后72h达高峰，感染率达60%。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后，实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达，且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论　携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白，抑制细胞凋亡。