人宫颈癌细胞辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶选择性剪接新亚型的表达及多克隆抗体制备

【摘要】目的？制备宫颈鳞癌细胞中辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）选择性剪接新亚型NRDRB1多克隆抗体，为NRDRB1的功能研究奠定基础。方法？扩增NRDRB1开放阅读框，重组入Gateway原核表达系统pDEST14，并在大肠杆菌BL21-AI中诱导表达，制备NRDRB1包涵体，使用从SDS-PAGE凝胶中回收的NRDRB1重组蛋白作为免疫原，经肩胛骨下注射免疫新西兰白兔。斑点杂交测定抗血清效价，HiTrapProteinG柱纯化兔IgG，免疫印迹和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果？NRDRB1在大肠杆菌BL21-AI中高效表达，回收的NRDRB1蛋白溶液浓度为0.42mg/ml。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清。血清效价为l∶2000，对NRDRB1蛋白的检测极限是6.4ng。纯化后的NRDRB1抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论？NRDRB1原核表达载体的构建、蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备为今后研究该蛋白的功能奠定了良好的基础。