水稻RAPD反应体系的正交优化

以焦旱1号总DNA为材料,首先对影响RAPD-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了初步优化,分析了各因素对RAPD-PCR扩增结果的影响。在此基础上对影响RAPD-PCR反应的Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等4个主要因素进行正交优化,研究结果表明:在25μlRAPD-PCR反应体系中,模板DNA20ng;Mg2+浓度1.5mmol/L;dNTP的浓度0.2mmol/L;引物量15pmol;TaqDNA聚合酶1.0U。在此最佳条件下,利用引物B8对18个北方粳稻品种进行了成功的扩增。