华根霉前导肽和成熟肽脂肪酶基因的克隆表达及性质研究

以华根霉(RhizopuschinensisCCTCCM201021)为出发菌株,提取总DNA,PCR扩增出前导肽脂肪酶基因(proRCL)及成熟肽脂肪酶基因(mRCL),克隆到原核载体pET-28a,转化E.coliBL21(DE3),诱导表达并纯化出活性目的蛋白。经SDS-PAGE分析,重组蛋白ProRCL和MRCL的分子量分别约43kD和33kD。两重组脂肪酶主要酶学性质基本相似,最适反应温度均为35℃,40℃下较为稳定;最适反应pH相近,分别为8.0和8.5;以pNP脂肪酸酯为底物,均对短链脂肪酸酯底物特异性较高。MRCL上述性质与野生型RCL基本一致。研究结果表明,通过条件控制可以利用E.coli表达系统表达具有活性的华根霉前导肽脂肪酶ProRCL和成熟肽脂肪酶MRCL。与米根霉脂肪酶(ROL)不同,前导序列对华根霉脂肪酶的主要酶学特性没有显着影响。