高羊茅胚性悬浮细胞系的快速建立及其单细胞培养

本研究采用高羊茅(Millennium和HundogⅤ)成熟种子为材料,以MS为基本培养基,通过添加2.5mg/LCu-SO4.5H2O,或提高NH4NO3浓度至2.5g/L等措施均能明显提高愈伤组织的质量,经过3～5个月的筛选获得疏松干燥、颗粒状、生长旺盛、适合悬浮培养的Ⅱ型胚性愈伤组织。悬浮培养初期需用MSⅠ液体培养基进行一个月的启动培养,之后转用MSⅡ继代保持,约2个月左右即建立起来自高羊茅2个品种的3个悬浮细胞系。生长特性测定结果表明,悬浮培养的初始接种量以1.0～3.0ml/40ml为宜,生长周期内其pH值不断波动变化,最适范围在5.0～5.7之间。5～8d为悬浮系的对数生长期,此时细胞分裂旺盛,增殖较快,是分离单细胞的最佳时期。单细胞培养方式以悬浮培养效果最好。