大鼠gremlin1真核表达载体的构建及表达

构建大鼠gremlin1的真核表达载体pcDNA-gremlin,并观察其在真核细胞中的表达。从大鼠脑组织中提取mR-NA通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及巢式聚合酶链反应(nest-PCR)获得编码gremlin1的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中;经酶切和测序鉴定构建正确,应用脂质体法转染HSC-T6细胞,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内grem-lin1的表达。结果显示,构建了大鼠gremlin1的真核表达载体,转染HSC-T6细胞培养48h后,收集并裂解转染细胞,蛋白免疫印迹法检测到转染HSC-T6细胞内gremlin1的表达显着增高。成功构建了真核表达载体pcDNA-gremlin,为研究gremlin在大鼠肝纤维化发生发展过程中的作用及作用机制奠定了基础。