侵染辣椒的黄瓜花叶病毒CP基因的序列分析、原核表达及抗血清制备

从吉林长春感病辣椒上获得一黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)分离物(CMV-CC),根据GenBank中已登录的CMV外壳蛋白(coatprotein,CP)基因核苷酸序列设计简并引物,通过RT-PCR的方法克隆到了长度为657bp的目的片段。序列分析表明,CMV-CC与CMVI组各分离物核苷酸同源性为93.2%-97.9%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:38个CMV分离物可分为3个组,CMV-CC属于CMV的IB亚组。将CMV-CCCP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达出分子量约27kD的融合蛋白。表达的融合蛋白经树脂纯化后免疫家兔制备了抗血清。用间接ELISA测定抗血清效价为1/4096。Westernblotting分析表明制备的抗血清对CP有高度特异性,为准确、快速地检测CMV奠定了基础。