甲醇利用菌SDM11中glyA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

对甲醇降解菌Methylobacterium.spSDM11中的glyA基因进行克隆及特性研究,以获得更多的丝氨酸羟甲基转移酶(serinehydroxymethyltransferase,SHMT)资源。根据GenBank中已报道的MethylobacteriumextorquensAM1中的glyA基因序列(登录号:L33463)设计引物,以SDM11的基因组DNA为模板,PCR扩增glyA基因。利用pETblue-2载体将该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达。PCR扩增到一个1.40kb大小的DNA片段,经过blast软件比对分析,发现该片段与已报道的MethylobacteriumextorquensAM1的glyA基因的序列相似性为95%,氨基酸序列的相似性为98%。该基因编码468个氨基酸,预测的分子量大小为52.2kD,等电点为7.02,发现纯化后的目标蛋白具有SHMT酶活性,并初步测定了酶活力。