青霉菌聚半乳糖醛酸酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究

筛选得到一株能分解果胶的青霉菌(Penicilliumsp.),使用简并引物PCR和TAIL-PCR方法从该菌中克隆了一个聚半乳糖醛酸酶基因pgp1。pgp1基因全长1225bp,包含2个内含子,其cDNA全长1104bp,编码367个氨基酸和一个终止密码子,前18个氨基酸为信号肽序列。将pgp1基因连接pPIC9载体,在巴斯德毕赤酵母表达系统中进行了异源表达。在3L发酵罐水平,培养基中聚半乳糖醛酸酶活力达到700U/mL。酶学性质测定表明,重组酶蛋白PGP1的最适pH为5.0,在pH4.0-6.0下处理1h后,剩余酶活力超过90%;最适温度为38℃,以聚半乳糖醛酸为底物,PGP1的Km=(1.172±0.169)mg/mL,Vmax=(0.061±0.002)mg/min/mL。