东亚三角涡虫DjPreb基因干扰载体的构建及干扰效果鉴定

以含有东亚三角涡虫DjPreb基因的pcDNA3-DjPreb重组质粒为模板,经PCR扩增目的片段,将其克隆到干扰载体L4440上,构建重组质粒L4440-DjPreb后转化入大肠杆菌HT115感受态细胞中,IPTG诱导表达dsRNA后喂食涡虫。显微观察喂食dsRNA后的涡虫在再生过程中的表型变化,Real-timePCR检测载体对涡虫DjPreb基因的表达抑制效果。试验结果显示DjPreb基因的RNA干扰表达载体构建成功,DjPreb基因RNA干扰后涡虫不能正常再生。Real-timePCR分析饲喂RNA干扰食物后DjPrebmRNA的表达显著下降,进一步说明DjPreb在涡虫头尾的形成中发挥作用。