小鼠B16黑色素瘤细胞核迁移蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

利用RT-PCR方法从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆了全长核迁移蛋白C(NucleardistributionC,NUDC)基因,构建了该基因的毕赤酵母表达质粒pPICZaA-NUDC并在受体细胞PichiapastorisGS115中获得表达,通过制备融合表达蛋白的多克隆抗体分析其对黑色素瘤细胞活性的影响。结果表明,克隆的NUDC基因全长1000bp,含有完整的编码框,经SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,该基因相对分子质量约为45kD。表达的蛋白能与兔抗NUDC抗体发生反应,制备的NUDC蛋白抗体可抑制黑色素瘤细胞生长。