一种简易高效的小麦叶片胞间液蛋白提取方法的建立

植物细胞间液中的蛋白在植物生长发育和抗病抗逆反应及其信号传导过程中发挥着重要作用,是植物学研究的新热点。由于细胞间液含量低,容易因组织细胞损伤性受到胞内成分污染,高纯度的细胞间液蛋白的提取相对困难,参考相关文献报道,建立了一种简易高效的小麦叶片细胞间液蛋白的提取方法。选取小麦品种"铭贤169"幼苗叶片为材料,用50mmol/LNaAc缓冲液充分浸润,负压处理20min后,30×g离心5min除去叶片表面缓冲液,随后2000×g离心15min,收集小麦叶片胞间液。将获得的小麦叶片胞间液冷冻干燥后,进行SDS-PAGE分离分析。电泳胶图上显示出细胞间液提取物与叶片组织提取物的蛋白质组成有极显着差异,使用MALD-TOF/TOFMS技术分析SDS胶上的细胞间液蛋白条带,共鉴定到9种非高丰度或假定的蛋白,其中有两种是已报道过的植物细胞间液蛋白。试验结果表明,本方法简易高效,适用于小麦蛋白质组学研究中高纯度的细胞间液蛋白的提取。