缢蛏SRAP-PCR体系的正交优化

运用L_(16)(4~5)正交设计对影响缢蛏SRAP-PCR反应的5个因素:Taq酶浓度、Mg~(2+)浓度、模板DNA浓度、dNTPs浓度和引物浓度在4个水平上进行了优化试验,PCR结果采用SPSSv16.0软件分析。结果表明,各因素对SRAP-PCR反应的影响依次为:引物>Taq酶>模板DNA>Mg~(2+);缢蛏SRAP反应最佳体系为:在20μLPCR反应体系中,引物0.3μmol/L、Taq酶0.5U、模板DNA50ng、dNTPs0.2mmol/L及Mg~(2+)2mmol/L。用不同缢蛏的基因组DNA两次SRAP-PCR扩增,8对引物均能扩增出清晰且重复性好的谱带。因而建立的缢蛏反应体系稳定可靠。