肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶基因在大肠杆菌中的表达

以肠膜明串珠菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到1581bp的蔗糖磷酸化酶(SPase)DNA片段。将该基因克隆到表达载体pET-22b(+)上,构建获得重组质粒pET-SPase。测序结果与GenBank上已公布的基因序列比较,有1个碱基发生变化,但该碱基的改变未引起氨基酸序列的改变。将pET-SPase转化到EscherichiacoliRosetta(DE3)感受态中,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约为55kD,与预期大小一致,结果表明SPase基因在大肠杆菌中进行了表达。酶活分析,产物的比活为1.8U/mg,证明了表达产物具有预期的酶活性。进一步考察了IPTG浓度、诱导温度和时间等因素对重组菌表达的蔗糖磷酸化酶的影响。在优化条件下,该蔗糖磷酸化酶的比活可以达到16.6U/mg,比优化表达条件前的酶比活提高了9.2倍,比已报道的肠膜明串珠菌粗酶液比活(7.1U/mg)提高了2.34倍。