吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶分离纯化方法改进及结构研究

利用改进的新方法,对吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(TGase)进行分离纯化。将发酵上清液经过硫酸铵分级盐析后,用HitrapQHP阴离子交换柱除掉干扰较大的色素,之后又经Superdex7510/300GL凝胶柱和HitrapQHP阴离子交换柱的分离,得到高纯度的TGase。纯化后TGase的比活力可达24.5U/mg,回收率为39.9%。TGase的N-末端前6个氨基酸经测序为DAADER。该研究是对吸水链霉菌TGase的N-末端氨基酸序列的首次报道。将吸水链霉菌TGase的N-末端氨基酸序列与已报道的其它3种链霉菌来源的TGase的N-端氨基酸序列进行比对,序列相似性不高。预测和分析了吸水链霉菌TGase的高级结构,为进一步研究TGase结构和功能的关系,蛋白分子定向改造提供理论依据。