猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10的表达及鉴定

为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株非结构蛋白Nsp10,以克隆质粒pMD18-T-Nsp10/JL为模板,将Nsp10基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对不同温度和IPTG浓度进行优化,以获得Nsp10蛋白表达的最佳条件,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,并通过Westernblotting检测其免疫活性。结果表明,Nsp10基因成功克隆至pET-32a,有分子量约为43.4kD的融合蛋白获得表达,重组蛋白于诱导4h后达到高峰,IPTG浓度为0.2-1.2mmol/L时,重组蛋白表达量无明显差异,Westernblotting证实该表达蛋白具有反应原性。