大肠杆菌酸性磷酸酶基因克隆表达及应用

将大肠杆菌K-12的酸性磷酸酶(AphA)完整基因和去信号肽基因分别克隆到pET-28a(+)载体上,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中。经诱导检测,重组菌均能表达出高活性的可溶性酶蛋白,去信号肽表达更稳定。对重组菌的活性研究表明,相对于野生菌,重组菌酶活力得到大幅度提高,同时,以pNPP、肌苷为底物进行磷酸转移催化反应,在pH4.0-6.0、反应温度37℃条件下,约有30%的肌苷可转化为IMP,但随着反应的进行所形成的IMP又被该酶降解,向反应液中加入EDTA即可明显抑制酶的水解活性,减缓IMP的降解速率。