幽门杆菌Catalase/GST融合蛋白的表达、标签切除及鉴定

旨在利用GST融合基因表达系统表达幽门螺杆菌Catalase融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签。将重组质粒Catalase/pGEX-4T-1转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,用IPTG进行诱导表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,Catalase/GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达在上清中。采用谷胱甘肽琼脂糖树脂GlutathioneSepharose4B对其进行纯化,得到Catalase/GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Westernblotting鉴定。高效表达出Catalase/GST融合蛋白的相对分子质量约85kD,凝血酶成功地切除了GST标签,Westernblotting证实Catalase蛋白能被鼠抗Catalase单克隆抗体识别。