谷氨酸棒杆菌ldh基因的敲除

谷氨酸棒杆菌中ldh基因编码乳酸脱氢酶,可催化丙酮酸转化生成乳酸。利用重叠延伸PCR的方法,获得中间缺失部分序列的dldh基因片段,将其与载体pk18mobsacB连接,转化大肠杆菌感受态,筛选出阳性转化子后,转化谷氨酸棒杆菌ATCC13032感受态细胞。分别在卡那霉素抗性平板及10%蔗糖平板上进行两次筛选,利用PCR方法鉴定,成功获得ldh基因缺失的谷氨酸棒杆菌突变株ATCC13032-Δldh。应用荧光定量PCR检测,ATCC13032-Δldh中的ldh基因在转录水平与野生型菌株ATCC13032相比,相对表达量为0。ldh基因的敲除对菌株的生长造成了一定的影响。