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ISSN: 2333-9721
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毕赤酵母电转化方法的探索

, PP. 156-161

Keywords: 毕赤酵母,电转化,转化效率

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Abstract:

旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率。采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量,在不同的电压下进行转化,计数转化后在平板上产生的克隆数,通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率。研究表明,用0.1mol/LLiAc,0.01mol/LDTT,0.6mol/Lsorbitol,0.01mol/LTris-HCl处理细胞可获得最佳转化效率;质粒DNA用量为10ng时转化效率最高。使用0.1cm电转杯,采用0.6kV电压,对80μL细胞进行转化,转化效率最高,可达9.6×105/μgDNA;而使用0.2cm电转杯,采用1.1kV电压,对150μL细胞进行转化,转化效率最高,可达8.8×105/μgDNA。采用优化后条件,用10μgpPIC9K质粒DNA转化GS115,可获得1.1×106个转化子。此外通过对3种常用毕赤酵母载体转化效率的比较,发现pPIC9K的转化效率约是pPICZαA的160倍,是pGAPZαA的2900倍。采用优化后的转化条件,毕赤酵母的电转化效率从103-4提升到了106。采用单个电转杯最多可获得1.1×106个转化子。

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