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ISSN: 2333-9721
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一种高效快速鉴定酵母转化子的酵母菌落PCR方法

, PP. 137-140

Keywords: 酿酒酵母,菌落PCR,转化子,阳性克隆

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Abstract:

酵母是一种重要的基因工程宿主菌,但是由于其细胞壁结构复杂牢固,普通的菌落PCR方法的成功率较低。为解决此问题,提供一种快速、简单、高效的酵母菌落PCR方法。该方法先利用溶壁酶溶解酵母细胞壁,然后利用热涨裂解细胞并进行PCR反应。此方法将酵母细胞裂解和PCR在同一个PCR管中完成。试验结果显示此方法能成功扩增目的基因且成功率高。将此方法应用于外源性内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)的酿酒酵母转化子筛选,经与基因组PCR比较,菌落PCR与基因组PCR结果一致。结果证明此方法具有良好的稳定性,适用于酿酒酵母转化子的快速筛选。

References

[1]  阳辛凤, 高秋芳, 李锡敏, 等. 菌落PCR快速扩增工业酿酒酵母基因组DNA片段[J]. 生物技术通报, 2010(9):215-219. [2] 于景芝. 酵母生产与应用手册[M]. 北京:中国轻工业出版社, 2005:12. [3] Gü ssow D, Clackson T. Direct clone characterization from plaques and colonies by the polymerase chain reaction[J]. Nucleic Acids Res, 1989, 17(10):4000. [4] 刘晓永, 王强, 胡永金.用微珠涡流法破壁酵母细胞[J]. 吉首大学学报, 2006, 27(6):110-113. [5] Yamada R, Taniguchi N, Tanaka T, et al. Cocktail δ-integration:a novel method to construct cellulolytic enzyme expression ratio-optimi-zed yeast strains[J]. Microbial Cell Factories, 2010(9):32-39. [6] 彭苗苗, 李晓玲, 张德春.毕赤酵母转化子表型的菌落PCR鉴定方法研究[J].江苏农业科学, 2011, 39(3):63-64. [7] 蔡欣, 段聚宝, 邹民吉, 等.一种快速鉴定重组酵母克隆的方法[J].军事医学科学院院刊, 2000, 24(2):151-152. [8] 王志博, 潘军, 张永根, 等. 用酶法对啤酒酵母细胞破壁优化条件的研究[J].东北农业大学学报, 2008, 39(3):76-79.

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