单链抗体2F5和4E10的原核表达、纯化和鉴定

为深入研究2F5和4E10抗体，构建了特异性识别HIV-1病毒MPER区域的2F5和4E10单链抗体的重组质粒，进行了融合蛋白的表达、纯化及鉴定。利用重叠PCR扩增及基因重组技术，获得2F5-scFv和4E10-scFv基因，将其插入原核表达载体pET-28a（+）上，获得表达质粒。转入大肠杆菌BL21（DE3）及Rosetta-gami2（DE3）pLysS中，IPTG诱导表达，SDS-PAGE检测发现，2F5-scFv和4E10-scFv在两种表达菌中均以包涵体形式存在，重组蛋白分子量分别约为27kD、29kD。变性条件下，利用镍离子螯合层析方法对包涵体蛋白进行纯化，经复性后获得可溶性单链抗体。ELISA检测表明，制备的单链抗体与原核和真核表达的MPER抗原都有特异性结合活性。