P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响

构建PcDNA3.1/necdin真核表达载体并制备稳定过表达Necdin的P19细胞克隆，检测稳定过表达Necdin对P19细胞增殖的影响。从正常培养P19细胞提取RNA反转录成cDNA，以此作为PCR模板扩增得到necdin目的基因，插入PcDNA3.1载体的EcoRⅠ和XhoⅠ位点；脂质体法将构建的真核表达载体PcDNA3.1/necdin转染P19细胞，G418筛选后挑取细胞单克隆，Western印迹鉴定细胞单克隆中Necdin的表达水平。CCK-8法检测过表达necdin对P19细胞增殖的影响。成功构建PcDNA3.1/necdin真核表达载体并获得稳定高表达Necdin的P19细胞克隆，检测发现P19细胞过表达Necdin后其细胞增殖未发生明显变化。P19细胞稳定过表达外源Necdin对其细胞增殖无明显影响。