地芽孢杆菌Geobacillussp.GXS1α-淀粉酶的饱和突变及酶学性质研究

采用半理性设计方法，在网站Geno3D上以PDB数据库中B.stearothermophilus麦芽糖淀粉酶（BSMA）的三维结构为模板，对AMY（α-淀粉酶）进行三维结构同源建模（二者氨基酸的同源性为33％）。比较同源建模预测的3D结构和模板BSMA的3D结构关键位点，在此基础上通过计算机辅助设计软件ProSa2003，根据能量变化确定了AMY三个饱和突变位点：D192、E221和D289。利用兼并引物对AMY的假定活性中心位点D192、E221和D289的氨基酸分别进行饱和突变，定点（饱和）突变库筛选得到4个有活力的突变子D192A、E221N、E221L和D289L，并对突变酶的酶学性质进行初步研究。