利用间隔肽促进S-腺苷甲硫氨酸合成酶在毕赤酵母中的分泌表达

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是所有生物体中都存在的一种重要分子,对维持生物体功能具有重要的作用,已经被广泛地用于治疗肝脏疾病、关节炎和忧郁症等多种疾病。利用巴斯德毕赤酵母KM71构建基因工程菌K/9KM,在AOX1启动子调控下分泌表达达观链霉菌(Streptomycesspectabilis)来源SAM合成酶(MAT)。为促进MAT的分泌,在信号肽Kex2p切割位点后引入间隔肽G-Spacer(NTTEEGEPK),构建重组菌K/GM,其重组蛋白(GM)表达量达到84.7mg/L,分泌效率提高了92%,MAT比酶活提高了58%。在重组蛋白GM的C端融合表达His-tag,构建重组蛋白GMH表达重组菌K/GMH,GMH的MAT比酶活比GM下降13%,但分泌效率无显著改变。因此,间隔肽G-Spacer对MAT的酶活及分泌有显著的促进作用,而His-tag会降低MAT的酶活力但不影响其分泌效率。所构建的MAT分泌表达基因工程菌K/GMH,在目的蛋白C端融合表达His-tag可减少分离纯化步骤和产物损失,易于酶促转化法生产SAM。