牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定

旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法，并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料，离心收集细胞进行原代培养并传代，通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定，以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3d后形成多个单克隆，细胞呈典型的铺路石状，同时伴随少量的吞噬细胞，继续培养至单克隆汇合时，细胞表层产生大小不等的乳滴，吞噬细胞大多转移到乳滴中，传代后，得到纯净的乳腺上皮细胞，吞噬细胞随传代而消失；细胞生长曲线呈“S”型，RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白，细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8，核型为29对端着丝粒常染色体，1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明，乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞，建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。