全部 标题 作者
关键词 摘要

OALib Journal期刊
ISSN: 2333-9721
费用:99美元

查看量下载量

相关文章

更多...

烟粉虱全基因组DNA四种提取方法的比较

, PP. 70-75

Keywords: DNA提取,烟粉虱,KAc法,氯仿-异戊醇法,盐析法,苯酚法

Full-Text   Cite this paper   Add to My Lib

Abstract:

获得大量、高质量的全基因组DNA是在DNA水平上研究许多生物的分子机制的基本前提。微小昆虫由于其体型微小,单头提取DNA浓度低,无法满足部分试验所需。为寻找一种方便、快捷、高效的全基因组提取方法,参考国内外单头微小昆虫基因组DNA提取常用方法,以烟粉虱为研究材料,选取醋酸钾(KAc)法、盐析法、氯仿-异戊醇法和苯酚提取法四种方法进行多头烟粉虱的全基因组DNA提取。通过微量核酸蛋白分析仪、基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、甲基化敏感扩增多态性(Methylationsensitiveamplificationpolymorphism,MSAP)引物扩增产物的琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量,并综合分析各提取方法所需时间及所用试剂的毒性大小。结果表明,盐析法提取的DNA平均浓度为521ng/μL,纯度能满足分子检测要求,用MSAP引物能得到较好的扩增结果,相比其它方法,盐析法更简便、快速且无毒。因此盐析法是多头烟粉虱全基因组DNA提取的最佳方法。

References

[1]  Mound LA, Halsey SH. Whitefly of the world. A systematic catalogue of the Aleyrodidae(Homoptera)with host plant and natural enemy data[M]. Chichester:John Wiley and Sons, 1978.
[2]  Perring TM. The Bemisia tabaci species complex[J]. Crop Prot, 2001, 20(9):725-737.
[3]  De Barro PJ, Liu SS, Boykin LM, Dinsdale AB. Bemisia tabaci:a statement of species status[J]. Ann Rev Entom, 2011, 56:1-19.
[4]  Hu J, De Barro PJ, Zhao H, et al. An extensive field survey combined with a phylogenetic analysis reveals rapid and widespread invasion of two alien whiteflies in China[J]. PLoS One, 2011, 6(1):e16061.
[5]  刘树生. 烟粉虱是一个物种复合体[J]. 中国生物防治学报, 2012, 28(4):466.
[6]  刘银泉. 烟粉虱的分类地位及在中国的分布[J]. 生物安全学报, 2012, 21(4):247-255.
[7]  吴秋芳. 烟粉虱研究进展[J]. 河南农业科学, 2006(6):19-24.
[8]  秦丽, 王佳. 利用mtCOI PCR-RFLP技术鉴定中国境内九个烟粉虱隐种[J]. 昆虫学报, 2013(2):186-194.
[9]  Costa H, Brown J. Variation in biological characteristics and esterase patterns among populations of Bemisia tabaci, and the association of one population with silver leaf symptom induction[J]. Entomol Exp Appl, 1991, 61(3):211-219.
[10]  吕志创.天敌对烟粉虱捕食作用的SCAR检测和FQ-PCR评价[D]. 南宁:广西大学, 2005:17-20.
[11]  滕希, 武强, 万方浩.盐析法提取烟粉虱基因组DNA[J]. 生物技术通报, 2009(8):166-168.
[12]  周志湘, 万方浩, 张桂芬, 等.烟粉虱基因组DNA快速提取方法[J].植物保护, 2007, 33(5):131-133.
[13]  Bender W, Spierer P, Hogness DS, Chambon P. Chromosomal walking and jumping to isolate DNA from the ace and rosy loci and the bithorax complex in Drosophila melanogaster[J]. J Mol Biol, 1983, 168(1):17-33.
[14]  Santella RM. Approaches to DNA/RNA Extraction and whole genome amplification[J]. Cancer Epidem Biomar, 2006, 15(9):1585-1587.
[15]  Hansen TO, Simonsen MK, Nielsen FC, Hundrup YA. Collection of blood, saliva, and buccal cell samples in a pilot study on the danish nurse cohort:comparison of the response rate and quality of genomic DNA[J]. Cancer Epidem Biomar, 2007, 16(10):2072-2076.
[16]  Yaish MW, Peng M, Rothstein SJ. Global DNA methylation analysis using methyl-sensitive amplification polymorphism(MSAP)[J]. Methods Mol Biol, 2014, 1062:285-298.
[17]  Joseph S, David W.分子克隆实验指南[M].第3版.北京:科学出版社, 2002:1824-1828.

Full-Text

Contact Us

service@oalib.com

QQ:3279437679

WhatsApp +8615387084133