丙氨酰-谷氨酰胺二肽对仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin定位与表达的影响

本试验以分离自仔猪空肠上皮的IPEC-1细胞为模型，探讨丙氨酰-谷氨酰胺二肽（Ala-Gln）对仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin定位与表达的影响。试验选取同代IPEC-1细胞接种至6块6孔细胞培养板上，分别用含0（对照组）、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00mmol/LAla-Gln的DMEM高糖培养基进行培养，待细胞生长融合达70%以上时，对occludin进行免疫荧光定位和蛋白质印迹（WesternBlot）检测。结果表明：1）对照组细胞可见其胞质内存在团状的阳性荧光染色，而细胞间连接处阳性荧光染色不明显；随着Ala-Gln浓度的升高，细胞间连接处荧光信号逐渐增强，细胞轮廓更加清晰，而胞质内荧光信号逐渐减弱。2）各添加组IPEC-1细胞间occludin的相对表达量均极显著高于对照组（P<0.01）。随着Ala-Gln浓度的升高，occludin的相对表达量呈先增后减的趋势，添加量为2.00mmol/L时达到峰值，且极显著高于其他添加量（P<0.01）。由此可知，Ala-Gln可以上调仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的表达，促进细胞间紧密连接结构的形成，进而增强仔猪小肠黏膜的屏障功能。